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GB29921-2021《食品安全國家標準 預包裝食品中致病菌限量》于2021年9月7日發(fā)布，2021年11月22日實施。“致瀉大腸埃希氏菌”突然就成了焦點！

在2013版本中，原檢測項目為大腸埃希氏菌O157:H7/NM。然而隨著對致瀉大腸埃希氏菌檢驗、鑒定能力的提升，越來越多的由其引起的暴發(fā)和病例被識別出來，其導致的疾病負擔以往也可能被低估。我國食源性疾病監(jiān)測結(jié)果顯示，近幾年細菌性食源性疾病暴發(fā)事件中，致瀉大腸埃希氏菌引起的事件數(shù)已經(jīng)上升到第五位，高危食品主要為肉制品、蔬菜、水果等。

2021版標準修訂將“大腸埃希氏菌O157:H7”修改為“致瀉大腸埃希氏菌”，并對肉制品中的牛肉制品、即食生肉制品、發(fā)酵肉制品類，即食果蔬制品中的去皮或預切的水果、去皮或預切的蔬菜及上述類別混合食品規(guī)定了限量要求n=5，c=0，m=0/25g。

（來源：食品安全國家標準數(shù)據(jù)檢索平臺）

致瀉大腸埃希氏菌是什么？

致瀉大腸埃希氏菌是一類能引起人體以腹瀉為主的大腸埃希氏菌，可經(jīng)過污染食物引起人類發(fā)病。常見的致瀉大腸埃希氏菌主要包括：

腸道致病性大腸埃希氏菌EPEC

腸道侵襲性大腸埃希氏菌EIEC

產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌ETEC

產(chǎn)志賀毒素大腸埃希氏菌STEC（包括腸道出血性大腸埃希氏菌EHEC）

腸道集聚性大腸埃希氏菌EAEC

致瀉大腸埃希氏菌如何檢測？

GB4789.6-2016致瀉大腸埃希氏菌檢驗流程：

目前國標PCR確認試驗方法為普通PCR法。

接下來帶大家了解一下美正的兩種PCR檢測方案>>

1. 普通PCR檢測流程及產(chǎn)品介紹

2. 熒光定量PCR檢測流程及產(chǎn)品介紹

致瀉大腸埃希氏菌檢測注意事項及常見問題>>

操作注意事項??

（1）PCR鑒定前需將菌純化于非選擇性的固體培養(yǎng)基上；

（2）所有PCR操作需嚴格分區(qū)，不同區(qū)域內(nèi)儀器物品不可混用；

（3）所有冷凍試劑使用前需融化混勻短暫離心后開蓋使用；

（4）試劑避免反復凍融，大體積試劑可配置后小體積分裝冷凍；

（5）操作需要帶手套，不可使用帶熒光物質(zhì)或者是帶粉末的手套；

（6）提核酸加熱后需冷卻到室溫后在開蓋操作，避免氣溶膠污染；

（7）PCR管及管蓋上不可使用記號筆標記；

（8）不同批次試劑盒試劑不可混用；

（9）嚴格按照試劑盒說明書設(shè)定反應參數(shù)和熒光通道。

? 用熒光定量PCR符合標準要求嗎？??

答：這個不好說，一般按照不同的評審員的理解來要求。多數(shù)評審員應該會算是一種方法偏離吧。但是熒光定量PCR在技術(shù)上肯定是更先進的，至少明顯降低了污染風險和生物安全風險，是今后食品微生物學檢驗技術(shù)的發(fā)展方向。GB 4789.6－2016的6.5.8條款：如用商品化PCR試劑盒或多重聚合酶鏈反應（MPCR）試劑盒，應按照試劑盒說明書進行操作和結(jié)果判定。這時候，我使用商品化熒光定量PCR試劑盒，是不是就可以按照試劑盒說明書進行了？大家可以探討一下。

現(xiàn)在的食品實驗室是否可以通過改裝成分子實驗室？食品檢測的BSL-II室可以和PCR實驗室共用嗎？??

答：食品實驗室本來就可以包括分子實驗部分。所以，常規(guī)食品微生物檢測的生物安全二級實驗室可以和PCR實驗室共用。但是，因為生物安全二級實驗室必須是負壓或者常壓，而PCR實驗室是相對正壓，還有人流物流的多次進進出出，在防止交叉污染方面比較辛苦。最好還是不要合并使用。

美正可提供“致瀉大腸埃希氏菌”從前處理及增菌培養(yǎng)到PCR確認試驗整體解決方案，并提供全程技術(shù)支持培訓服務。